利用热不对称交错PCR(TAIL-PCR),对200个含T-DNA插入的转基因水稻株系
进行分析,获得了159个T-DNA右边界侧翼序列。其中,92个序列含有T-DNA右边界和侧邻的水稻基因组序
列,78个序列与已公布的水稻BAC/PAC克隆有97%~100%的同源性,从而可作为T-DNA标签定位在水稻的1
2条染色体上.结合先前定位的169个T-DNA标签,对T-DNA在水稻基因组中的整合特点进行了分析。结果发
现,在T-DNA右边界和侧邻的水稻基因组序列的连接处,14.6%的T-DNA标签含有3~74bp的填充序列。在
不含填充序列的连接处,21.3%的T-DNA标签,在整合后的T-DNA右边界与侧翼的水稻基因组序列之间显示
出3~5 bp的微同源性。填充序列和微同源性的存在,揭示了T-DNA在水稻基因组中的整合既存在双链断裂
修补机制,又存在单链裂缝修补机制。T-DNA倾向于整合到富含A/T核苷酸的基因组区域,即主要在基因的
5'和3'端调控区以及内含子中。(图2表3参22)
注:
(1)文章来源:生物化学与生物物理进展 2004年31卷第10期;
(2)作者单位:中国科学院微生物研究所植物基因组学国家重点实验室。
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